四位幸存者主角分别是Coach、Ellis、Nick和Rochelle，他们是玩家在游戏中可以操控并合作求生的核心角色。Coach是一位44岁的前高中橄榄球教练，体格魁梧，是团队中经验丰富且富有领导力的成员，他常以乐观态度鼓励队友并展现出对信仰的虔诚，Ellis则是一名23岁的机械修理师，性格开朗天真，热衷于讲述关于朋友基斯的各种夸张故事，为团队在沉重的末日氛围中注入了不少活力，Nick身穿白色西装，外表斯文但实际上是一名赌徒和骗子，他从一个城市漂流到另一个城市，对人性的看法持怀疑态度，不太轻易信任他人，唯一的女性角色Rochelle年龄29岁，她是一名地方电视台新闻节目的初级制作助理，性格冷静务实且注重团队协作，其时尚的穿着在末日背景下显得格外与众不同，这些角色不仅拥有独特的外形，其职业背景与性格特征也通过游戏中的台词和互动得到了充分的展现，让整个求生旅程的人物形象非常立体。
尽管四位幸存者的性格和背景故事迥异，但他们在实际游戏中的战斗能力是完全一致的，这种设计强调了团队协作的重要性，而非突出个人英雄主义，在游戏进程中，角色之间的差异主要体现在视觉外观和语音对话上，例如Coach会因为膝盖旧伤而抱怨行动不便，Ellis的过度乐观时常被Nick吐槽，而Rochelle则经常扮演调解队友争执的角色，这些生活化的对话设计让角色形象更加丰满，也让玩家更容易对他们产生情感投射，开发团队通过大量细节刻画，成功地将四位普通人在面对毁灭性灾难时的真实反应与互动呈现了出来。
游戏中的敌对人物主要是各种各样的感染者，他们构成了玩家生存挑战的主要部分，感染者分为一般感染者和特殊感染者，一般感染者是游戏中最常见的低级敌人，智商和护甲都很低，但其中也会混杂一些穿着防护衣、工地装备或防暴装的特殊一般感染者，他们拥有不同的特性，比如穿着防护衣的无法被火焰伤害，穿着防暴装的正面几乎免疫攻击，特殊感染者则由于病毒发生了变异，外形、体魄和能力都与普通感染者有极大差异，例如Boomer（呕吐者）能将胆汁呕吐到幸存者身上吸引普通感染者围攻，Hunter（猎手）是所有特殊感染者中速度最快、机动性最强的，能够飞扑伤害幸存者，这些各具特色的感染者种类丰富了游戏的挑战性和战术应对需求。
